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消化道肿瘤类器官模型的构建与应用体会
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8月4日,「类器官大讲坛」第五期,南京大学医学院附属鼓楼医院张舒博士的精彩分享圆满结束。张舒博士的分享主题为:消化道肿瘤类器官模型的构建与应用体会。
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张 舒 博士
南京大学医学院附属鼓楼医院消化科 主治医师
张舒博士目前主要从事消化道肿瘤的早诊早治工作,及基于类器官模型、单细胞测序等解析肿瘤微环境与表观遗传学相关发病机制等,目前主持国家自然科学基金及江苏省自然科学基金多项,并发表SCI论著十余篇。2014-2016年在美国纪念斯隆凯特琳癌症中心访学期间师从David Tuveson教授、Steven Leach教授等学习胰腺癌类器官构建技术。2017年开始基于南京大学医学院附属鼓楼医院平台构建消化道肿瘤类器官模型库(organoid bank),目前已利用外科手术切除标本及内镜下穿刺或活检标本,构建胰腺癌及胃癌类器官模型超过100例,并完成部分模型的测序及药物筛选工作,为进一步探索胰腺癌、胃癌的发生发展与远处转移机制,以及为临床患者的精准治疗方案评估,提供了绝佳的平台。
接下来,为大家带来精彩片段文字版。
类器官指的是能够促进细胞自我更新、并最终模拟器官构造的培养体系。类器官目前有两个来源,一种是多能干细胞来源,主要用于器官发育及疾病发展的机制研究;另一种就是人体组织、尤其是肿瘤组织来源的类器官,主要成分是上皮细胞。
消化道肿瘤类器官是目前培养最为成熟、应用最为广泛的肿瘤类器官模型,主要的消化道器官包括食管、肝、胰腺、胃、肠等,均已完成了正常组织来源及肿瘤来源的类器官模型构建。张舒博士主要围绕胰腺类器官模型的构建进行分享。
“癌王”治疗新思路
时至今日,对胰腺癌来说依旧没有理想的筛查模式,多数患者一旦发现就是晚期。如何建立胰腺癌体外模型、评估临床化疗药物的治疗效果,筛选个体化治疗方案;如何预测胰腺癌的复发和转移、优化治疗方案、改善胰腺癌患者的预后等成了胰腺癌治疗面临的临床诊治困境。
类器官较传统模型构建方法更为简便、时间短、花费相对较低、更接近于胰腺癌在体内的生长环境,是理想的胰腺癌研究模型。
胰腺癌、胃癌类器官模型库的构建及经验
在过去的几年内,张舒博士团队尝试基于鼓楼医院外科手术切除标本及胃镜手术下的活检标本构建类器官模型库。从中也总结出了一些经验,就培养基而言,Aframin和Wnt3a conditioned medium培养基可以代替Wnt3a-conditioned Medium培养基。
综合文献报道,一般认为2周内形成类器官形态即可定义为初始构建成功,可传代五代以上认为构建成功。截至目前,张舒博士团队共**了112例胰腺癌外科手术切除标本,其中99例构建成功,成功率达88.4%。对胃癌外科手术标本类器官模型的构建,共**21例胃癌外科手术切除标本,有17例构建成功,成功率达81.0%。
很大一部分胰腺癌患者一经发现就是晚期,失去手术机会,无法获得手术标本,因此这部分患者的胰腺癌类器官建模就成为难题。张舒博士团队试想通过超声内镜穿刺获取胰腺癌标本用于胰腺癌类器官模型的构建,研究表明超声内镜穿刺所得标本同样可以用于胰腺癌类器官模型的构建。本项研究已分别在美国Clinical Trials 官网及中国临床试验注册中心完成注册。
截至目前,张舒博士团队已经**了21例胰腺癌患者穿刺标本,有15例建模成功,成功率达71.4%。张舒博士从中总结出了一些经验,即在用穿刺标本构建类器官模型时应避免使用红细胞裂解液,可最大限度地避免活细胞的损失,甚至可以跳过初始的组织消化步骤。
人源胰腺癌类器官模型在药物筛选与功能学研究中的应用
张舒博士针对POACO21这个胰腺癌类器官模型进行表观遗传抑制剂文库筛选发现,HDAC抑制剂、BET抑制剂、组蛋白去甲基化酶抑制剂、Aurora A抑制剂均具有显著的抗胰腺癌活性。张舒博士挑选了Aurora A抑制剂进行了进一步研究,发现Drug H在体外能有效抑制胰腺癌类器官的增殖能力;类器官免疫组化染色也提示Drug H在体外可抑制胰腺癌细胞增殖、诱导ATF4/Gadd45α表达;类器官免疫荧光染色提示Drug H在体外可促进胰腺癌细胞凋亡,抑制其增殖。
人源类器官构建裸鼠原位移植瘤模型(PDOX)
类器官模型在体外只能体现部分肿瘤的微环境,张舒博士设想通过将类器官模型移植到裸鼠体内来构建体内的类器官模型以方便后续药物筛选及分子生物学机制的研究。通过研究发现,人源类器官构建的原位移植瘤模型可以模拟从胰腺低级别上皮内瘤变-高级别上皮内瘤变-导管腺癌的完整发展过程,为研究胰腺癌的发生发展机制提供了绝佳的体内模型。
类器官大讲坛
「类器官大讲坛」是由南方医学网、南方类器官、创芯国际、衡山论健联合打造的线上分享交流平台,邀请类器官技术研究与应用方面的专家学者,围绕基础研究、技术进展、转化应用等方面进行线上分享。类器官大讲坛致力于推广类器官技术,通过类器官知识科普方式,让更多医生、行业人全面了解肿瘤类器官技术。
“衡山论健”组委会
“衡山论健”专注于组织医疗大健康领域线上线下的权威学术会议、公益讲座、高端论坛等活动。组委会以学术为引导、行业为核心、科普为载体,致力打造高端、前沿的交流学习平台。
中国微循环学会转化医学专业委员会
中国微循环学会是国家一级学会,隶属中国科技协会,主要从事生物医学微循环领域相关研究和学术交流。转化医学专业委员会为中国微循环学会下属专委会,学科方向包括:肿瘤血管微循环,心脏血管微循环,脑微循环,消化系统微循环等。
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